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01. 研究背景
(1) 研究问题：这篇文章主要探讨了使用MaxCyte流式电穿孔技术进行病毒载体（包括腺相关病毒和慢病毒）生产的方法和效率。
(2) 研究难点：传统的病毒载体生产技术劳动密集、步骤多且效率低，难以满足大规模生产的需求。
(3) 相关工作：MaxCyte的流式电穿孔技术作为一种通用的瞬时转染平台，旨在解决病毒载体生产的诸多问题。
02. 研究方法
提出了使用MaxCyte流式电穿孔技术进行病毒载体生产的方法。具体来说包括：
(1) 细胞类型：该技术适用于贴壁细胞和悬浮细胞。
(2) 多质粒共转染：MaxCyte系统可以同时转染多个质粒，包括大质粒，从而制造复杂的病毒载体。
(3) 可扩展性：MaxCyte系统在不同规模的细胞培养中表现出一致的高转染效率和细胞活力。
03. 实验设计
(1) 大规模慢病毒生产：在贴壁HEK细胞中使用MaxCyte STX进行四质粒共转染。
• HEK 293FT细胞在转染前2-3天在10层细胞工厂中接种。
• 使用流式电穿孔技术进行共转染，每天收集培养基并测量转导单位。
(2) 悬浮细胞中的慢病毒生产：悬浮适应的HEK 293FT细胞在10L Wave Cellbags中培养，通过流式电穿孔技术转染慢病毒组件质粒。
• 转染后的细胞被返回Cellbags中。
• 在GMP合规的核心设施中进行3次生产运行，每次运行均显示出高滴度。
(3) 不同规模下的慢病毒生产一致性：通过静态电穿孔和流式电穿孔（使用MaxCyte）。
• 测量转染后48小时的慢病毒滴度，结果显示无论规模大小，生产力一致。
(4) 高效的高滴度AAV生产：在贴壁HEK细胞中使用MaxCyte STX进行三质粒共转染。
• 转染后48小时，几乎100%的转染细胞表现出强劲的转基因表达。
• 通过qPCR分析测量细胞沉淀中的高滴度AAV。
04. 结果与分析
(1) 大规模慢病毒生产：在贴壁HEK细胞中，使用MaxCyte STX进行四质粒共转染，每天收集培养基并测量转导单位，结果显示高效的生产能力。
(2) 悬浮细胞中的慢病毒生产：在悬浮适应的HEK 293FT细胞中，使用MaxCyte系统进行生产，3次生产运行均显示出高滴度，表明该技术在悬浮细胞中的可扩展性和一致性。
(3) 不同规模下的慢病毒生产一致性：通过静态和流式电穿孔在HEK细胞中生产慢病毒，结果显示无论规模大小，生产力一致。
(4) 高效的高滴度AAV生产：在贴壁HEK细胞中，使用MaxCyte STX进行三质粒共转染，结果显示几乎100%的转染细胞表现出强劲的转基因表达，并且通过qPCR分析测量到高滴度的AAV。
总体结论
MaxCyte的可扩展电穿孔技术允许对贴壁和悬浮适应细胞进行高效转染。该技术能够共转染多个质粒和大质粒，制造复杂的病毒载体。MaxCyte转染过程的一致性使得无论培养规模如何，生产产量都具有一致性。高效的悬浮细胞转染简化了使用MaxCyte过程进行病毒载体制造的可扩展性。通过MaxCyte电穿孔技术生成的高滴度AAV展示了该技术在制造应用中的多样性。
* 本文转载自「拓普百奥」微信公众号，作者：宇文数学（已获得作者授权）
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